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口蹄疫病毒O型（FMDV-O）競爭ELISA抗體檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

中文名稱：口蹄疫病毒O型（FMDV-O）競爭ELISA（C-ELISA）抗體檢測試劑盒

英文名稱：Competitive ELISA Kit for Detecting Antibody of Foot and Mouth Disease Virus type O

【簡介】

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性、熱性高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，一旦發(fā)病，將會引起嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。FMDV屬于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒屬，目前已知共有7中血清型，即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亞洲1型。

FMDV感染或免疫后，產(chǎn)生抗體的主要中和表位在VP1蛋白，本試劑盒基于VP1蛋白，采用競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(C-ELISA)，配備全套診斷試劑和材料，可用于檢測豬、牛、羊等動物血清或血漿中的O型口蹄疫病毒(FMDV-O)抗體，適用于動物疫苗免疫抗體的定性檢測及動物群體抗FMDV-O感染風(fēng)險能力的評估。試劑盒具有敏感性高、特異性強、穩(wěn)定性好、操作簡便快捷的特點。

【檢測原理】

本試劑盒采用競爭ELISA法，在酶標(biāo)板上預(yù)先包被FMDV-O VP1重組蛋白作抗原，以針對VP1蛋白的表位型特異單抗作中和競爭抗體（即酶標(biāo)記物）。實驗時，加入待檢血清和單抗酶標(biāo)記物，則待檢血清種等FMDV-O特異性抗體與酶標(biāo)記物競爭結(jié)合包被在酶標(biāo)板上的FMDV-O VP1重組蛋白。通過洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分，加入底物顯色。用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)物的OD值，判定實驗結(jié)果。

【試劑盒組分】

【樣本要求】

盡量使用新鮮采集的血清樣品；不能用于檢測嚴(yán)重污染或嚴(yán)重溶血的樣品；如果血清樣本渾濁，需離心后取上清進行檢測；檢測樣品可在2~8℃保存5天，長時間保存需要轉(zhuǎn)移至-20℃或更低溫環(huán)境中。

【實驗準(zhǔn)備】

1．試劑盒組分回溫平衡：試劑盒所有組分在使用前取出，置恒溫箱（25±3℃）中至少30 min，恢復(fù)至室溫。

2．配制洗滌液：將試劑盒提供的濃縮洗滌液用去離子水稀釋10倍（如：10 mL 10×濃縮洗滌液＋90 mL去離子水）。

【操作方法】

1．加樣：按照“微孔板加樣位置示例圖"向抗原包被板樣品孔內(nèi)預(yù)先加入40 µL樣本稀釋液，在對照孔內(nèi)分別加入50 µL陰性對照血清(NC)和50 µL陽性對照血清(PC)。然后在樣品孔中加入10 µL待檢血清，樣品稀釋比例為1:5。

微孔板加樣位置示例圖

2．加酶：每孔加入50 μL酶標(biāo)記物，輕輕混勻。樣品稀釋變?yōu)?/span>1:10，即反應(yīng)體系為100 µL/孔。

3．溫育：輕輕振蕩混勻（勿溢出），蓋上封板膜，37℃孵育30 min。。

4．洗板：棄去孔中液體，每孔加300 μL洗滌液，洗滌3次，最后一次洗滌后將酶標(biāo)板在吸水紙上輕輕拍干，嚴(yán)禁各步驟之間孔板出現(xiàn)干燥情況。

5．顯色：每孔加入100 μL顯色劑，輕輕混勻，蓋上封板膜，37℃避光孵育10 min。

6．終止：每孔加入50 μL終止液，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。

7．讀數(shù)：使用酶標(biāo)儀測定450 nm波長處的光密度值（OD值）。

【結(jié)果判定】

1．實驗成立條件：陰性對照平均OD值＞0.6，陽性對照平均OD值＜0.4。

2．計算方法：OD_NC均值＝(OD_NC1＋OD_NC2)/2

3．樣品S/N值計算公式：S/N＝樣本OD值/ OD_NC均值

4．判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N≤0.5，判為陽性；S/N＞0.5，判為陰性。

【注意事項】

1．儲存條件為2~8℃。試劑盒開啟前應(yīng)確認(rèn)其批號及有效期。

2．過期產(chǎn)品請勿使用，不同批號的試劑盒組分禁止混用。

3．試劑盒使用前各組分試劑均須恢復(fù)至室溫（25±3℃），使用后放置2~8℃保存。

4．應(yīng)注意避免向試劑盒中引入污染。移液器吸頭必須一次一換。

5．實驗所用儀器（如：微量移液器、恒濕培養(yǎng)箱、ELISA洗板機、酶標(biāo)儀）需要在使用前進行功能檢查，確保其可用性、準(zhǔn)確性。

6．所有試劑嚴(yán)禁接觸皮膚和粘膜。檢測結(jié)束后所用耗材需按國家規(guī)定進行無害化處理。

7．未用的微孔板條可裝入密封袋中2~8℃保存。

8．試劑盒中各組分容器只針對該組分使用，不可二次利用。

【儲存條件及有效期】

2～8℃保存，有效期12個月。

【規(guī)格】96T×2/盒

【生產(chǎn)日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

僅供獸醫(yī)診斷使用

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